氨基酸自動分析儀是一種用于測定蛋白質水解產物中氨基酸含量的儀器。它能夠對氨基酸進行自動分析,主要依賴于以下幾個關鍵步驟和技術原理:
1、樣品預處理:在進行分析之前,需要將蛋白質樣品水解成單個氨基酸。這通常通過酸水解、堿水解或酶水解等方法實現。水解后的樣品需要經過脫鹽、濃縮等處理,以便于后續分析。
2、衍生化反應:為了提高氨基酸的檢測靈敏度和選擇性,通常需要對氨基酸進行衍生化處理。常用的衍生化試劑有鄰苯二甲醛(OPA)和氨基酮酸(AAA)等。衍生化反應使氨基酸生成具有熒光或紫外吸收特性的產物,便于后續檢測。
3、色譜分離:衍生化后的氨基酸通過液相色譜(LC)或離子交換色譜(IEC)進行分離。色譜柱內的固定相具有特定的選擇性,能夠根據氨基酸的性質將其分離。常用的色譜柱有陽離子交換柱、陰離子交換柱和反相色譜柱等。
4、洗脫和檢測:分離后的氨基酸通過洗脫液從色譜柱中洗脫出來,然后進入檢測器進行檢測。常用的檢測器有熒光檢測器、紫外檢測器和質譜檢測器等。檢測器根據氨基酸衍生物的光學或質譜特性,生成相應的信號。
5、數據處理和分析:檢測器產生的信號被傳輸到數據處理系統,通過積分、校正和比對等處理,最終得到氨基酸的定量結果。數據處理系統還可以對數據進行存儲、輸出和報告生成等操作。
6、自動化控制:整個分析過程由計算機控制系統進行自動化控制。控制系統可以實現樣品加注、衍生化反應、色譜分離、洗脫、檢測和數據處理等步驟的自動控制,提高分析效率和準確性。
總之,氨基酸自動分析儀通過對樣品進行預處理、衍生化、色譜分離、洗脫和檢測等步驟,實現了對氨基酸的自動分析。這一過程依賴于先進的液相色譜技術、離子交換技術、熒光或紫外檢測技術以及自動化控制技術,能夠高效、準確地測定蛋白質水解產物中的氨基酸含量。